Дисертації

Permanent URI for this community

https://repository.biph.kiev.ua/handle/123456789/1

Browse

Browsing Дисертації by Subject "Ca2+"

Now showing 1 - 2 of 2
  • No Thumbnail Available
    Item
    Роль сірководню (H2S) у регуляції кальцієвого гомеостазу та функцій мітохондрій серця дорослих і старих щурів
    (2020) Лучкова Аліна Юріївна; Сагач Вадим Федорович, професор, доктор медичних наук, член-кор. НАН України
    Дисертаційна робота присвячена дослідженню ролі сірководню (H2S) як ендогенної регуляторної молекули у гомеостазі кальцію в мітохондріях серця дорослих і старих щурів. При застосуванні інгібітора мітохондріального ферменту синтезу H2S знижувався його вміст у мітохондріях та плазмі крові. При цьому погіршувалися показники кардіодинаміки, зокрема тиск у лівому шлуночку, швидкість скорочення і розслаблення міокарда знижувалися вдвічі, а коронарний потік на 11,8 %. За умов кальцієвих навантажень серця дослідних тварин розвивали менш потужну реакцію, яка проявлялась у знижених значеннях Pлшл, скорочувальної активності, КП та ІСФ міокарда. Максимальна інотропна стимуляція серця у контрольних тварин спостерігалася у відповідь на додавання 7,5 ммоль/л CaCl2, тоді як у дослідних щурів при 5 ммоль/л CaCl2. Це свідчить про зниження функціональних резервів міокарда у тварин за умов пригнічення синтезу сірководню мітохондріальним ферментом. Також з’ясовано, що за умов пригнічення синтезу сірководню зростали показники окисного стресу, такі як супероксидний та гідроксильний радикали, відбувалося посилення перекисного окиснення ліпідів та збільшення активності іNOS, на тлі зменшення функціональної активності сNOS як в мітохондріях серця, так і в плазмі крові дослідних щурів. Вперше виявлено, що екзогенний сірководень (10-6 - 10-7 моль/л) підвищував вхід Са2+ в мітохондрії серця дорослих та старих щурів в умовах кальцієвого навантаження, при цьому 10-5 моль/л NaHS попереджав відкривання мітохондріальної пори в органелах, що свідчить про регуляцію сірководнем транспорту Ca2+ у мітохондріях та важливе фундаментальне значення цього відкриття. У той же час пригнічення ендогенного утворення H2S in vivo знижувало поріг чутливості мітохондріальної пори до Са2+ та підвищувало амплітуду набухання мітохондрій серця дорослих та старих щурів за дії інгібітора in vitro. В роботі вперше показано, що пригнічення мітохондріального ферменту синтезу сірководню in vivo знижувало функціональну здатність електронно-транспортного ланцюга мітохондрій, яка проявлялась у зменшенні швидкості споживання кисню у станах V2, V3 та V4, а також показників дихального контролю та АДФ/О за Чансом. Отже, ендогенний сірководень регулює транспорт кальцію в органелах, виконує антиоксидантну роль та підтримує роботу електронно-транспортного ланцюга в мітохондріях серця щурів різного віку
  • No Thumbnail Available
    Item
    Характеристика механочутливих іонних каналів в гладеньком'язових клітинах детрузора сечового міхура щур
    (2024) Єльяшов Семен Ігорович; Шуба Ярослав Михайлович, д.б.н., проф., академ
    У дисертаційній роботі наведені нові результати щодо механочутливості гладеньком’язового шару (детрузора) сечового міхура (СМ) та внеску іонних каналів TREK-1, Piezo1 та TRPV4 у загальну механочутливість у гладеньком’язовій клітині (ГМК). Ці канали походять із різних родин, проте, мають спільну чутливість до механічної стимуляції, як то тиск, потік рідини або розтягнення, що є типовими подразненнями для СМ. Головними механорецепторами СМ є аферентні нейрони та вистилаючий внутрішню порожнину уротеліальний шар. Однак, сам детрузор, та, власне, ГМК також мають самостійну механочутливість, хоча робіт щодо цього не багато. Для дослідження механочутливості ізольованих міоцитів нами була сконструйована установка для створення гідродинамічної стимуляції клітинної мембрани вузьким потоком розчину. У цій роботі було вперше встановлено існування трьох популяцій ГМК за чутливістю до механічної стимуляції: перша (55%) електрофізіологічно нечутлива до механічного стимулу, друга (26%) генерує вхідний струм із Са2+/Na+-провідностями, третя (19%) має лише вихідний механоактивований струм із К+-провідністю. Методами ПЛР та імуноцитохімія встановили, що в детрузорі експресуються 3 механочутливі канали, а саме TREK-1, TRPV4 та Piezo1. Ми провели експерименти з прикладанням L-метіоніну (інгібітором TREK-1), чим заблокували 90% механоактивованого вихідного струму. Це доводить, що активність з 3-ї групи ГМК була спричинена саме активністю TREK-1, який є єдиним функціонально показаним у літературі механорецптором у ГМК детрузора. Крім цього, досліджуючи природу неселективного механочутливого каналу з 2-ї групи ГМК нами було виявлено, що механічна стимуляція ГМК детрузора генерує збільшення внутрішньоклітинної концентрації іонів Ca2+ ([Са2+]i). Подальші дослідження ГМК детрузора показали, що збільшення [Са2+]i не може бути пов’язаним з активністю TRPV4. Такий висновок був сформований на основі нечутливості ГМК до селективного активатора TRPV4 – GSK1016790A, показаної методами візуалізації кальцієвих сигналів Ca2+-чутливим барвником Fluo-4 та patch clamp. Крім цього, нами було вперше наведено докази функціональної присутності Piezo1 в ГМК детрузора. Yoda1 (селективний агоніст Piezo1) в ГМК детрузора та в нейронах ДКГ викликала канонічний Piezo1-опосередкований Ca2+-сигнал. Однак, під час електрофізіологічних експериментів Yoda1 інгібувало вихідні струми, замість активації високопровідних вхідних струмів, характерних для Piezo1. Наступні дослідження показали, що ефект від Yoda1 перекривався глібенкламід-індукованим блокуванням АТР-чутливого калієвого каналу (КATP). Це вказує на те, що Piezo1 може бути пов’язаний із регуляцією відкритого стану КATP, інгібуючи його активність через мобілізацію Ca2+ та пов’язане з ним подальше непряме сигналювання.